免疫組化檢查是一種通過(guò)抗原抗體反應(yīng)定位組織或細(xì)胞中特定蛋白質(zhì)的技術(shù)，主要用于病理診斷和腫瘤分型。免疫組化檢查方法主要有直接法、間接法、酶標(biāo)法、熒光法和多重標(biāo)記法。
1、直接法
直接法是將標(biāo)記物直接連接在特異性一抗上，操作簡(jiǎn)單且耗時(shí)短，適用于已知抗原的快速檢測(cè)。標(biāo)記物通常為熒光素或酶類(lèi)，可直接在顯微鏡下觀察結(jié)果。該方法靈敏度較低，但能減少非特異性結(jié)合，常用于科研中的初步篩查。
2、間接法
間接法通過(guò)二抗與一抗結(jié)合，二抗攜帶標(biāo)記物實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大，靈敏度比直接法高。常用的標(biāo)記物包括辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶，可通過(guò)顯色反應(yīng)增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)。該方法適用于低豐度抗原檢測(cè)，但步驟較多可能增加背景染色。
3、酶標(biāo)法
酶標(biāo)法利用酶催化底物產(chǎn)生顯色沉淀定位抗原，常用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體。顯色劑DAB能形成穩(wěn)定的棕色沉淀，結(jié)果可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察。該方法染色持久便于存檔，但需注意內(nèi)源性酶干擾問(wèn)題。
4、熒光法
熒光法采用熒光素標(biāo)記抗體，通過(guò)熒光顯微鏡觀察特異性信號(hào)。異硫氰酸熒光素和羅丹明是常用熒光染料，可實(shí)現(xiàn)多色標(biāo)記。該方法靈敏度高且能進(jìn)行共定位研究，但熒光易淬滅需避光保存標(biāo)本。
5、多重標(biāo)記法
多重標(biāo)記法可同時(shí)檢測(cè)多種抗原，通過(guò)不同熒光染料或酶標(biāo)系統(tǒng)區(qū)分信號(hào)。需優(yōu)化抗體組合避免交叉反應(yīng)，常用于腫瘤微環(huán)境分析。該方法能揭示分子間空間關(guān)系，但對(duì)設(shè)備和技術(shù)要求較高。
免疫組化檢查前需規(guī)范取材和固定，避免組織自溶影響結(jié)果。檢查后應(yīng)由病理醫(yī)師結(jié)合形態(tài)學(xué)綜合判斷，必要時(shí)補(bǔ)充分子檢測(cè)。日常工作中需定期校準(zhǔn)設(shè)備、設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照，確保檢測(cè)準(zhǔn)確性。特殊標(biāo)本可考慮冷凍切片或抗原修復(fù)處理以提高檢出率。