免疫組化染色結(jié)果分析需結(jié)合組織特異性標記物表達模式、染色強度及定位進行綜合判斷，主要影響因素有抗體特異性、組織固定質(zhì)量、抗原修復(fù)方法、內(nèi)源性干擾物質(zhì)及實驗操作規(guī)范性。
1、抗體選擇
抗體特異性直接影響結(jié)果可靠性。需驗證抗體與目標抗原的結(jié)合能力，排除交叉反應(yīng)。常用驗證方法包括Western blot、基因敲除對照。例如檢測ER蛋白應(yīng)選用經(jīng)FDA批準的克隆號SP1抗體，避免使用多克隆抗體導(dǎo)致假陽性。
2、樣本處理
組織離體后應(yīng)在30分鐘內(nèi)完成固定，使用10%中性緩沖福爾馬林固定6-48小時。過度固定會導(dǎo)致抗原表位掩蔽，固定不足易出現(xiàn)組織自溶。骨髓等特殊標本需采用B5固定液，脂肪組織建議延長固定至24小時。
3、抗原修復(fù)
高溫高壓修復(fù)法適用于多數(shù)核抗原，pH6.0檸檬酸緩沖液可有效暴露Ki-67等增殖標志物。膜蛋白CD20建議采用EDTA修復(fù)液。酶消化法對部分胞質(zhì)抗原如CD3效果顯著，但需控制胰酶濃度在0.05%-0.1%。
4、染色評估
陽性信號應(yīng)呈現(xiàn)特定亞細胞定位，核蛋白如p53需觀察細胞核著色，HER2檢測要求膜染色完整度超過10%。采用半定量評分系統(tǒng)：0分無著色，1+弱陽性，2+中等強度，3+強陽性。對照組織必須同步顯示預(yù)期染色模式。
5、結(jié)果解讀
結(jié)合形態(tài)學(xué)特征排除假陽性，如巨噬細胞CD68非特異性吞噬、邊緣效應(yīng)導(dǎo)致的邊緣強染色。雙重染色技術(shù)可驗證共表達情況，必要時進行基因檢測補充。乳腺癌HER2檢測需遵循ASCO/CAP指南，2+結(jié)果必須進行FISH驗證。
建議由兩名以上病理醫(yī)師獨立判讀，建立實驗室內(nèi)部質(zhì)控標準，定期參加CAP能力驗證。對于臨界值結(jié)果應(yīng)重復(fù)實驗，臨床治療相關(guān)標志物需在報告中注明檢測方法及判讀標準。日常維護需定期校準自動染色儀，每批次實驗設(shè)置陽性和陰性對照，未達預(yù)期染色效果時應(yīng)追溯實驗環(huán)節(jié)。